①：ELISA實驗中樣品都要做復孔或三孔，然后計算每個濃度標準品的平均OD值，復孔的變異系數應該小于20%。

　　②：平均OD值減去空白孔的OD值。

　　③：制作標準曲線。

　　以減去本底后的OD值為X軸，標準品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個合適的計算方法。建議使用合適的軟件來作圖，比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法（比如直線、半對數、對數、四參數方程等）并從中選擇一條zui合適的方程。要想檢驗某條曲線是否與表中數據吻合，可以將標準品的濃度作為未知數，將對應的OD值帶入該方程，計算出標準品的濃度，得到的結果應該與實際濃度很接近（+/-10%）。選擇擬合度zui高的那條曲線。

　　如果出現標準曲線的線性不好，或平行性不好（雙孔對照孔的OD值差別很大），或出現跳孔的現象，可能引起的原因有酶標板孔間相互污染、洗板后未能盡快進行下一步操作、添加樣品或其它試劑時操作的方法不對、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發、酶標板孔問加入的試劑量不同，相對應的解決辦法是加樣時請小心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時也請小心，勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時進行下一步操作、添加試劑時請懸空滴入，切記勿將槍頭接觸到板孔內，吸取不同試劑瓶中的液體時就要更換一次槍頭、確認孵育環境不透光，蓋板膜將酶標板密封好、使用已校正過的微量加樣器，如將*次加入液體時槍頭上留有一滴的液體滴下，那么將以后槍頭上留有的液體也滴下，以保證加入液體體積的一致性。